13 2025.03
怎樣在線做PCR引物設(shè)計(jì)
要先對(duì)PCR目的序列的長(zhǎng)度有個(gè)大致估計(jì):
第一步:找到Primer3的站點(diǎn)。你不用記住這個(gè)站點(diǎn),但是要記住“Primer3”這個(gè)詞,然后打開(kāi)GOOGLE首頁(yè),輸入Primer3,跳出來(lái)的第一個(gè)項(xiàng)目就是了“Prim [...]
13 2025.03
DNA電泳常見(jiàn)問(wèn)題分析之一
1 請(qǐng)問(wèn)配制聚丙烯酰胺凝膠電泳膠時(shí),促凝的是TEMED還是過(guò)硫酸銨?膠聚時(shí)間很長(zhǎng)如何解決?
過(guò)硫酸銨提供驅(qū)動(dòng)丙烯酰胺和雙丙烯酰胺聚合所需的自由基,而TEMED通過(guò)催化過(guò)硫酸銨形成自由基而 [...]
13 2025.03
PCR常見(jiàn)問(wèn)題分析之二/克隆
1 克隆PCR產(chǎn)物的最優(yōu)條件是什么?
最佳插入片段:載體比需實(shí)驗(yàn)確定。1:1(插入片段:載體)常為最佳比,摩爾數(shù)比1:8或8:1也行。應(yīng)測(cè)定比值范圍。連接用5ul 2X連接液, 50ng質(zhì)粒DNA,1Wei [...]
13 2025.03
核酸純化常見(jiàn)問(wèn)題分析之二/質(zhì)粒提取
1、從柱離心式產(chǎn)品的流行看經(jīng)典方法的缺點(diǎn) (或者操作重點(diǎn))
柱式方法的風(fēng)行是無(wú)法否定的現(xiàn)實(shí)。下面通過(guò)柱式方法與經(jīng)典方法的比較,看一看如何注意經(jīng)典方法的操作重點(diǎn)。
裂解,二者幾乎沒(méi) [...]
13 2025.03
如果不慎發(fā)生污染情況,該怎么辦?
如果不慎發(fā)生污染情況,應(yīng)從下面幾條出發(fā),逐一分析,排除污染。
(1)設(shè)立陰陽(yáng)性對(duì)照:有利于監(jiān)測(cè)反應(yīng)體系各成分的污染情況。選擇陽(yáng)性對(duì)照時(shí),應(yīng)選擇擴(kuò)增弱,且重復(fù)性好的樣品,因強(qiáng)陽(yáng)性 [...]
13 2025.03
PCR常見(jiàn)問(wèn)題分析之一
1 PCR產(chǎn)物的電泳檢測(cè)時(shí)間
一般為48h以內(nèi),有些最好于當(dāng)日電泳檢測(cè),大于48h后帶型不規(guī)則甚致消失。
2 假陰性,不出現(xiàn)擴(kuò)增條帶,應(yīng)該怎么辦?
PCR反應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)有①模板核酸的制 [...]
13 2025.03
核酸純化前應(yīng)了解的常見(jiàn)問(wèn)題
1、 在提核酸前,對(duì)實(shí)驗(yàn)樣品你應(yīng)該知道什么?
樣品的核酸含量、酶含量、特殊雜質(zhì)含量。
絕大情況下,使用新鮮樣品可以獲得最好的結(jié)果,但對(duì)一些雜質(zhì)含量高的樣品,-20℃保存一天后抽提,可 [...]
13 2025.03
PCR操作時(shí)應(yīng)注意的事項(xiàng)
PCR檢測(cè)微量感染因子時(shí),容易因?yàn)槲廴镜亩鴮?dǎo)致各種問(wèn)題,因此,進(jìn)行PCR操作時(shí),操作人員應(yīng)該嚴(yán)格遵守一些操作規(guī)程,最大程度地降低可能出現(xiàn)的PCR污染或杜絕污染的出現(xiàn)。
(1)劃分操作區(qū) [...]
13 2025.03
PCR Mix的擴(kuò)增產(chǎn)物能直接測(cè)序嗎?
可以。測(cè)序公司在進(jìn)行PCR產(chǎn)物直接測(cè)序前,會(huì)對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化,去除體系中影響測(cè)序的組分,所以PCR Mix中的溴酚藍(lán)并不會(huì)影響后續(xù)測(cè)序反應(yīng)。
東盛生物提供含溴酚藍(lán)和不含溴酚藍(lán)兩種體系, [...]
13 2025.03
實(shí)驗(yàn)室自己可以配制PCR Mix嗎?
可以。但實(shí)驗(yàn)室自配的PCR Mix穩(wěn)定性差,無(wú)法長(zhǎng)期保存,且易出現(xiàn)靈敏度低、擴(kuò)增長(zhǎng)度短、重復(fù)性差等問(wèn)題,而東盛的PCR Mix添加了特殊的穩(wěn)定劑,可以確保在室溫2周或-20℃2年的條件下,擴(kuò)增效 [...]
13 2025.03
怎樣使用凝膠成像系統(tǒng)的定量分析
快捷指南Volumes Quick Guide,此功能能對(duì)任意所選區(qū)域進(jìn)行定量分析,此分析可以報(bào)告2個(gè)結(jié)果:相對(duì)濃度和絕對(duì)濃度(如有濃度標(biāo)準(zhǔn)樣品)
1. ?選擇成像系統(tǒng)或打開(kāi)已保存的文件(軟件可以控制 [...]
13 2025.03
Mix Kit系列相比Mix系列有什么不同?
在PCR實(shí)驗(yàn)中,選擇合適的試劑對(duì)于實(shí)驗(yàn)的成功至關(guān)重要。東盛公司推出了兩種不同的PCR試劑產(chǎn)品:2×PCR Mix和PCR Mix Kit。這兩種產(chǎn)品在組成、使用方法和特點(diǎn)上有所不同,適用于不同的實(shí)驗(yàn) [...]